Fraccionamiento Offgel
El fraccionamiento Off-Gel es una técnica de separación y fraccionamiento de proteínas basada en la electroforesis fuera de gel (Off-Gel Electrophoresis, OGE). Esta técnica se utiliza para separar y purificar proteínas en función de su punto isoeléctrico (pI) en muestras complejas, como lisados celulares, extractos de tejidos o muestras de proteínas recombinantes.
Funcionamiento del fraccionamiento Offgel
- Principio de la electroforesis Offgel (Off-Gel Electrophoresis, OGE): en la técnica de fraccionamiento Off-Gel, las proteínas presentes en una muestra compleja se separan en función de su punto isoeléctrico (pI) utilizando un gradiente de pH generado por electrodos. Este gradiente de pH se crea a lo largo de una tira de gel de poliacrilamida en la que se cargan las proteínas de la muestra.
- Fraccionamiento de proteínas: las proteínas migran hacia la región del gel donde el pH es igual a su pI. Una vez que las proteínas alcanzan su punto isoeléctrico, dejan de migrar y se acumulan en bandas discretas a lo largo de la tira de gel. Este proceso resulta en la separación de las proteínas en función de su pI en fracciones discretas.
- Recuperación de proteínas: una vez que se ha completado la separación, las proteínas se pueden recuperar de las bandas individuales en la tira de gel. Esto se puede lograr mediante la elución electrostática o mediante elución física de las proteínas de la tira de gel.
Aplicaciones
El fraccionamiento Off-Gel se utiliza en una variedad de aplicaciones en:
- proteómica y biología molecular, incluyendo la identificación y caracterización de proteínas,
- el análisis de muestras complejas,
- la purificación de proteínas para estudios posteriores y,
- la comparación de perfiles proteicos entre muestras.
Productos de electroforesis capilar
La electroforesis se utiliza en gran variedad de disciplinas científicas para separar, enriquecer y purificar biomoléculas que difieren en su estado de carga eléctrica. Agilent Technologies® es pionera en la introducción de sistemas de electroforesis capilar en el mercado. Desde entonces Agilent Technologies® ha liderado este área mediante la innovación en aplicaciones electroforéticas.
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El fraccionamiento previo de proteínas y péptidos antes del análisis LC/MS, puede aumentar drásticamente el número de proteínas identificadas en última instancia. El equipo OFFGEL Agilent 3100 de Agilent Technologies®, utiliza una nueva técnica de isoelectroenfoque para lograr pI excelente base para el fraccionamiento. Las fracciones resultantes están en solución, haciendo la recuperación para el análisis LC/MS mucho más fácil que con los geles anticuados. Los resultados son altamente reproducibles, y el OFFGEL Agilent 3100 es simple y fácil de usar.
En conclusión, el fraccionamiento Off-Gel es una técnica de separación y fraccionamiento de proteínas basada en la electroforesis fuera de gel que permite la separación de proteínas en función de su punto isoeléctrico (pI) en muestras complejas. Es una herramienta poderosa en proteómica y biología molecular para el análisis y la purificación de proteínas en estudios de investigación y desarrollo biomédico.